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En diciembre de 1562 Guisa trató de recuperar Orleans, pero fue asesinado el 18 de febrero de 1563 de un pistoletazo que le disparó el hugonote Jean de Poltrot de Méré, probablemente por orden de Gaspar de Coligny y estimulado por Teodoro Beza, famoso predicador.
A la muerte de Enrique II, Francisco II, casado con su sobrina, ascendió al trono. Esto fue un triunfo para la Casa de Guisa y el gran maestre de Francia, Montmorency, fue expulsado de la corte. El duque de Guisa y su hermano, Carlos, cardenal de Lorena, formaban la parte más importante del consejo real.
24. Francisco, duque de Guisa. Muertes del 24 febrero. Fallecimientos. 1563 feb., 24. Francisco, duque de Guisa (n. 1519) Francisco de Lorena II, primer príncipe de Joinville, también duque de Guisa y duque de Aumale (francés: François de Lorraine; 17 de febrero de 1519 - 24 de febrero de 1563), fue un general y político francés.
Francisco II de Francia ( Fontainebleau, 19 de enero de 1544- Orleans, 5 de diciembre de 1560) fue rey de Francia de 1559 a 1560. También fue rey consorte de Escocia, como resultado de su matrimonio con María I de Escocia, desde 1558 hasta su muerte en 1560.
Ardiente defensor del catolicismo, el duque de Guisa ahoga en sangre en 1560, la Conspiración de Amboise, apoyada por Luis, príncipe de Condé, y apoyada en secreto por Inglaterra. La muerte de Francisco II, en diciembre de 1560, aparta al duque de Guisa de la corte y del poder.
El 24 de febrero de 1563, Francisco, duque de Guisa, fue asesinado por el hugonote Jean de Poltrot durante el asedio de Orleans. Su muerte representa un punto de inflexión crítico en las guerras de religión francesas. Sería el primer gran asesinato en lo que se convertiría en una disputa sangrienta entre las distintas casas aristocráticas ...
La muerte del presunto heredero real, Francisco, duque de Anjou, en 1584, que convertía al rey protestante Enrique de Navarra en heredero del trono francés, dio lugar a una nueva guerra civil, la Guerra de los Tres Enriques, con el rey Enrique III de Francia, Enrique de Navarra y Enrique de Guisa luchando por el control de Francia.
